呼吸道常见病原体核酸检测

梁勇 桂林市疾病预防控制中心

核酸检测在临床上主要用于各类病原体检测，而以发热、咳嗽、咽痛等症状为主的呼吸道感染是最为常见的疾病之一，属于全球性的公共卫生问题。通过核酸检测的形式，针对可能引起呼吸道疾病的病原体进行检测，能够快速、灵敏、准确地对疾病进行预防和控制，也可以及时掌握当前呼吸道传染病不同病原体的流行特征和病原谱变化，提升对重点呼吸道传染病的监测预警能力，支持疫情研判、临床救治和疫苗研发等工作。

一、引起呼吸道疾病的常见病原体核酸有哪些

引起呼吸道传染病的常见病原体有新型冠状病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、偏肺病毒、鼻病毒、副流感病毒、普通冠状病毒、博卡病毒、肠道病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体和肺炎链球菌等，通过核酸检测的形式，能够及早发现并做规范治疗。

新型冠状病毒感染后会引发呼吸道病症，同时伴有发热、咳嗽、气促和呼吸困难等症状。严重者会引发肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。

甲型流感病毒是一种可以涉及人类以及动物的RNA病毒，危害性较大，容易引起大流行。

乙型流感病毒，容易引起季节性流行，如果儿童患病，容易出现重症。

呼吸道合胞病毒，该病毒感染很容易出现高热鼻炎、肺炎等，是造成婴幼儿呼吸道感染住院的首要因素。

腺病毒，感染后主要是以咳嗽、咽喉疼痛、高热等呼吸道症状为主，还容易引起重症肺炎。

偏肺病毒，属于RNA病毒，会引起发热、咳嗽、喉咙痛、流鼻涕和呼吸急促等症状，高发人群主要为儿童和老年人；严重时还会引发肺炎和哮喘等疾病。

人鼻病毒，属于一组单正链小分子RNA病毒，是导致呼吸道感染当中比较多见的一种致病因子。

副流感病毒，存在地方性流行特征，尤其是在晚秋或到第二年春天的这段时间，易引起儿童或婴幼儿急性呼吸感染，病情严重时会导致假膜性喉炎；成年人感染则常导致上呼吸道疾病，出现发热症状。

普通冠状病毒，冠状病毒是在自然界广泛存在的RNA病毒，除了常见的SARS-CoV、MERS-CoV和SARS-CoV2以外，还有能引起普通感冒的HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63和HCoV-HKU1等类型。

博卡病毒，好发于秋冬季，主要易感人群为儿童，尤以6~24个月的婴幼儿多见，感染后无症状或轻微症状，上、下呼吸道均可受累，多表现为咳嗽、发热、鼻溢、喘息等，也可表现为威胁生命的重症。

肠道病毒，属于一大类病毒的统称，主要侵犯呼吸道及肠道，引起包括发热、头痛、呼吸道感染疾病、咽痛，偶尔还有呕吐和腹泻等症状。

肺炎支原体，该病毒主要是经过飞沫进行传播，患者在感染后会引起头痛、咽喉痛、发热、咳嗽等症状。

肺炎衣原体，导致急性呼吸道感染的非典型病原，且非常常见。主要症状有咽痛、声音嘶哑、流鼻涕等，还会导致肺炎、支气管炎、咽炎等。

肺炎链球菌，各个年龄段儿童均会感染，一旦感染会导致出现大叶性肺炎或支气管炎。且发病急，同时伴有打冷战、高热、咳嗽、咳痰等多种病症，严重者会出现死亡。

二、呼吸道常见病原体核酸检测过程

核酸检测基于聚合酶链式反应技术，即PCR技术，可针对呼吸道常见病原体核酸进行检测，主要分为以下几个步骤：

一是样本采集，通常采用的是呼吸道、口鼻等部位的样本呼吸道标本，标本种类包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子、支气管肺泡灌洗液、胸腔穿刺液标本等。

二是样本处理，将采集到的样本进行样品处理，如拭子样本，一般需要储存在灭活或非灭活病毒保存管中，充分振荡混匀，取上清进行核酸提取。

三是DNA/RNA提取，从样本中提取病原体的核酸DNA或RNA。

四是反转录，若为RNA，则需先将RNA逆转录成DNA，再进行PCR检测。

五是PCR检测扩增，可以用实时荧光定量RT-PCR技术，将DNA扩增至足够数量，使用荧光探针或其他方法对PCR扩增产物进行检测，以此来确定样本中是否存在特定病原体。

三、呼吸道常见病毒核酸检测为什么会出现假阳性和假阴性

出现假阴性的原因，一是采集样本失败；二是转运时间过长或保存样本不当；三是进行提取、加样、进行PCR中某个环节出错，而PCR反应中任何环节出现问题都可能导致假阴性结果，应从PCR反应的关键环节中找到原因，包括模板核酸的制备、引物的质量与特性、酶的质量及活性、PCR反应条件、PCR反应产物鉴定等。

出现假阳性的原因较多，标本之间出现交叉污染，实验环境有PCR产物等气溶胶污染，实验过程中使用的耗材、设备等受污染都会造成假阳性检测结果的出现。