食品中肌醇的测定解读

本文转自：中国市场监管报

肌醇，又名环己六醇，分子式为C6H12O6，和葡萄糖分子式相同，是一种多羟基化合物，具有与维生素B1相类似的活性，易溶于水，微溶于乙醇、甘油、乙二醇等有机溶剂。肌醇广泛存在于自然界各种动植物和微生物的组织中，同时也是人体必需的一种营养因子，在维持胰岛素功能和生殖健康方面发挥着重要作用。

2020年，国家卫健委、市场监管总局联合发布《食品安全国家标准食品营养强化剂肌醇（环己六醇）》（GB 1903.42-2020）；2022年，国家卫健委发布公告，将肌醇作为食品营养强化剂的使用范围调整为调制乳粉（仅限儿童用乳粉）、果蔬汁（肉）饮料（包括发酵型产品等）、风味饮料和特殊膳食用食品。

此外，《食品安全国家标准食品营养强化剂使用标准》（GB 14880-2012）、《食品安全国家标准婴儿配方食品》（GB 107652021）、《食品安全国家标准较大婴儿配方食品》（GB 10766-2021）、《食品安全国家标准幼儿配方食品》（GB 10767-2021）等多个食品安全标准对肌醇的使用量进行了规定。而肌醇的测定标准《食品安全国家标准食品中肌醇的测定》（GB 5009.270-2023）于2023年9月6日发布，2024年3月6日正式实施。在今年的全国食品安全监督抽检实施细则中，特殊医学用途配方食品中肌醇的指定检测方法为GB 5009.270，婴幼儿配方食品中肌醇的指定检测方法在2024年3月6日后仅有GB 5009.270-2023中的第一法，因此本文就第一法——气相色谱法进行解读。

标准适用范围与基本原理

气相色谱法适用于婴幼儿配方食品、特殊医学用途配方食品、乳及乳制品以及饮料中肌醇的测定。

原理：试样中的肌醇用水提取，经乙醇沉淀，上清液离心干燥后，与硅烷化试剂衍生，衍生物经正己烷提取后采用气相色谱分离，氢火焰离子化检测器检测，外标法定量。

样品前处理

试样提取：称取混合均匀的固体试样1g或液体试样12g（精确至1mg）于100mL锥形瓶中，固体试样用12mL的40℃~45℃的温水溶解，超声提取10min。将处理过的试样溶液转入50mL容量瓶中，用95%乙醇定容至刻度，混匀，静置沉淀20min。若试样出现块状沉淀而非絮状沉淀现象，重新称取样品，用30mL40℃~45℃的温水溶解样品，加乙腈定容至刻度，混匀，静置沉淀20min。沉淀结束后，吸取10mL上清液，以不低于以4000r/min的转速离心5min后，准确移取5mL上清液于旋蒸瓶中干燥。

干燥：向待干燥试样中加入适量无水乙醇，在不超过80℃温度环境下旋转浓缩或氮吹至近干，于100℃烘干1h，取出冷却至室温。

衍生：向干燥后的试样中加入10mL硅烷化试剂（三甲基氯硅烷：六甲基二硅胺烷：N, N-二甲基甲酰胺=1∶2：8），超声5min，于25mL螺口玻璃瓶中密封混匀，于80℃水浴中衍生反应75min。其间，每隔20min取出振荡一次，结束后取出冷却至室温，加入5mL正己烷，涡旋2min，待静置分层后，取3mL正己烷萃取液于预先加入少许无水硫酸钠的离心管中，涡旋后以不低于4000r/min的转速离心5min，然后转移溶液至进样瓶中，此为试样测定液。

标准变化

1.气相色谱法调整为第一法，微生物法调整为第二法。

2.修改了气相色谱法的适用范围，调整为适用于婴幼儿配方食品、特殊医学用途配方食品、乳及乳制品、饮料，将婴幼儿配方食品和特殊医学用途配方食品纳入其中，扩大了方法的适用范围。

3.对气相色谱法中硅烷化试剂的配比和加入顺序进行调整，旧标准先加入10mLN, N-二甲基甲酰胺超声溶解试样，再加入3mL硅烷化试剂（三甲基氯硅烷：六甲基二硅胺烷=1：2）；新标准在试样干燥后直接加入配制好的硅烷化试剂（三甲基氯硅烷：六甲基二硅胺烷：N,N-二甲基甲酰胺=1：2：8）。将三种硅烷化试剂配制好再一起加入，一方面有利于提前观察三者混合是否出现白色沉淀从而导致重新配制的情况，另一方面也可以避免先加N,N-二甲基甲酰胺，导致衍生试剂失效。

4.样品前处理方法中增加了针对在沉淀过程中出现块状沉淀而非絮状沉淀的试样处理方法；样品干燥时增加了氮吹至干的方法，对于大批量检测样品，可有效节省时间。

5.色谱柱更改为弱极性柱，优化了进样条件和升温程序，使目标峰与杂质峰分离效果更好。

6.计算结果保留位数改为保留三位有效数字。

关键控制点

1.固体状态的肌醇标准品易受潮，因此在配制标准溶液之前，固体标准品应按标准进行干燥。标准溶液配制过程中，应先加水完全溶解后再加入95%乙醇，若直接用95%乙醇或70%乙醇溶解，易产生沉淀。

2.乳粉类样品易吸潮结块，因此样品需尽量在干燥的环境下保存。

3.涉及一个包装中有很多小包装样品时，为保证样品均匀性，需在不同小包装分取样品混匀制样。

4.部分样品特别是特殊医学用途配方食品，在前处理沉淀过程中易结块状沉淀，应重新处理试样，改用30mL40℃~45℃的温水溶解样品，加乙腈沉淀。

5.N,N-二甲基甲酰胺可与水混溶，三甲基氯硅烷遇到水或湿气会分解，六甲基二硅胺烷与水可发生反应，因此三种衍生试剂均应放置在干燥的地方。衍生试剂临用现配，配制过程不能接触水，如果在配制过程中出现白色沉淀且大量放热，说明容器或衍生试剂中含水，应更换容器重新配置或更换试剂重新配置。

6.样品干燥时所用的乙醇应是无水乙醇，干燥的样品加入衍生试剂后应超声至内容物完全溶解分散再进行衍生反应。样品中残留的水分会降低衍生效率，在有水的情况下直接衍生，硅烷化试剂优先与水反应，衍生效率低，因此样品衍生时应尽量在干燥的环境中。如果样品在仪器状态等其他情况正常时仍未出峰，衍生试剂失效的可能性较高，可考虑开封新衍生试剂或更换衍生试剂品牌。

7.在实际检测过程中，注意标准品应同步衍生，且每次实验均应采用质控手段来确保结果的准确性，质控手段优先选择购买不同来源的质控样，同时也可采用稳定样品留样再测辅助验证。

8.可采用优化色谱升温条件和质谱法验证等方式，排查是否具有基质干扰影响定性定量。

□四川省食品检验研究院 杨诗嘉 钟慈平